本课程通过教学使学生能够掌握细胞培养室的设置、设备和准备工作、动物细胞的原代培养、传代培养、观察、计数及活力测定、细胞的冻存与复苏、染色体技术及其应用等基本操作， 学习结束时学生能够独立进行细胞培养和细胞遗传的实验设计和操作。

组织培养基础知识

第一节  组织培养概述

一、 了解组织培养、细胞培养、体外培养的基本概念                   

二、 了解组织培养发展简史

三、 了解组织培养的优点、缺点

四、 了解组织培养的适用研究范围

五、 了解组织培养的应用领域

第二节  组织培养的细胞生物学

一、 熟悉培养细胞生存的条件：营养需要、生长环境和无污染、无毒

二、 掌握培养基的种类和应用：天然培养基和合成培养基

三、 掌握培养细胞的形态分类及特性

四、 掌握培养细胞的生长和增殖过程：原代培养和传代培养，细胞系和细胞株

五、 熟悉培养细胞的生物学指标

第三节  组织培养基本技术

一、熟悉组织培养基本要领和要求

二、熟悉培养细胞的取材

三、熟悉组织材料的分离

四、掌握原代培养过程

五、掌握传代培养和细胞系的维持过程

六、熟悉培养细胞的纯化过程

七、掌握细胞培养污染的检测和排除过程

实验一  细胞培养室的设置、设备和准备工作

一、 了解细胞培养室的基本设置

二、 熟悉细胞培养常用的设备及其性能和安全操作规程

三、 熟悉培养用具的处理规程

四、 熟悉细胞培养器材与试剂：超净工作台、CO2恒温培养箱、液氮容器、离心机、滤器、真空泵、显微镜、高压蒸气消毒器等。

五、 熟悉细胞培养实验室的设置

实验二  培养用液配制和培养基本操作要领

一、 了解培养用液配制过程

二、 初步掌握细胞培养操作要领。

三、 熟悉细胞培养用液的配制：三蒸水、平衡盐溶液、天然培养基、合成培养基

四、 掌握细胞培养的基本操作要领：无菌操作、培养细胞取材

实验三  动物细胞的原代培养

一、 熟悉原代细胞培养的基本方法及操作过程

1、  消化法

2、  组织块法

二、 掌握细胞消化、细胞计数、营养液的配制及酸碱度的调节

三、 初步掌握无菌操作方法

实验四  细胞传代培养、观察、计数及活力测定

一、 掌握传代培养、细胞计数及活力测定的方法

二、 熟悉培养细胞的类型及生长过程。   

三、 熟悉超净台、C02培养箱、普通显微镜、倒置显微镜、血球计数板等器材操作

四、 掌握培养细胞生长状态、类型和生长过程的操作。

五、 掌握细胞的消化法传代培养过程

六、 掌握细胞活力的测定方法：染色、计数、计算

实验五　细胞的冻存与复苏

一、 熟悉细胞冻存与复苏原理

二、 熟悉细胞冻存与复苏常用器材与试剂：冻存管、培养瓶、0.25%胰蛋白酶、二甲基亚砜

三、 掌握细胞冻存与复苏的基本方法

实验六  克隆(集落)形成试验

一、熟悉测定细胞增殖能力的原理和方法。

二、熟悉平板克隆形成试验、软琼脂克隆形成试验的方法和应用

实验七  细胞分裂指数和贴壁率的测定

一、 了解细胞分裂指数和贴壁率测定的原理。

二、 了解细胞分裂指数和贴壁率的常用器材与试剂

三、 了解细胞分裂指数和贴壁率测定的常用方法

实验八　人外周血淋巴细胞培养

一、 熟悉人外周围淋巴细胞培养原理。

二、 掌握人外周血淋巴细胞培养方法。

三、 熟悉人外周血淋巴细胞培养的常用器材与试剂

四、 了解人外周血淋巴细胞的分离方法

实验九　人类染色体标本制备

一、 熟悉人类染色体标本制备的实验原理：低渗和固定。

二、 了解人类染色体标本制备的常用器材与试剂

三、 掌握人外周血淋巴细胞染色体制备技术

四、 了解影响人类染色体标本制备成功的各种因素。

实验十　人类非显带染色体核型分析

一、 熟悉人类染色体的数目及形态特征。

二、 熟悉非显带染色体的核型分析的实验原理：染色体核型、ISCN、相对长度

三、 了解非显带染色体的核型分析的常用器材与试剂

四、 掌握非显带染色体的核型分析方法：染色体分类、分组。

实验十一　人类染色体G显带技术及G带核型分析

一、   熟悉染色体的G显带的实验原理

二、   掌握染色体G带标本的制备技术：胰蛋白酶法。

三、   了解人类染色体的G显带的带型特征和其它G带标本的制备技术：EDTA·胰蛋白酶法、SSC·胰酶双重作用法。

四、   掌握光学显微镜下G显带染色体核型分析方法。

实验十二　人类染色体高分辨G带标本制备技术

一、   了解人类染色体高分辨G带标本制备技术的实验原理

二、   掌握染色体高分辨G显带标本制备的操作技术：过量TdR同步化法、氨甲喋呤（MTX）同步化法。

三、   了解高分辨G显带染色体的带型特征。

四、   了解高分辨G显带技术的应用

实验十三　人绒毛细胞染色体标本制备

一、 了解绒毛细胞染色体标本的制备方法。

二、 掌握细胞培养过程中的无菌技术。

三、 了解绒毛细胞染色体分析在产前诊断中的意义。

实验十四　人类脆性X染色体标本的制备

一、 熟悉脆性X染色体标本制备的方法。

二、 了解脆性X染色体与智力低下的关系和脆性X染色体的检测在临床上的意义。

实验十六　人类染色体核仁形成区的银染显示与观察

一、 熟悉人类染色体核仁形成区的银染技术。

二、 熟悉核仁形成区所在部位及其结构特征。

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